Ministerio de Agricultura, Pesca y Alimentación

Diagnóstico de Lengua Azul: Primer Paso

La duración de la viremia en los rumiantes infectados por el VLA es prolongada, e incluso el ARN del VLA puede detectarse mediante RT-PCR en ausencia de virus infeccioso en la sangre de los rumiantes, durante un tiempo considerablemente mayor.  Esta mayor sensibilidad de detección y la reducción del tiempo necesario para el diagnóstico son las razones por las que la RT-PCR es el método de elección para la confirmación de los casos clínicos, y la sangre con EDTA y los órganos de los animales muertos, como el bazo, el pulmón o los ganglios linfáticos, son las muestras de elección para el diagnóstico del agente. 

Hasta la fecha se han publicado varios métodos de RT-PCR en gel y de RT-PCR en tiempo real, dirigidos a segmentos virales conservados entre serotipos. En los Ensayos interlaboratorio de aptitud organizados anualmente por el EURL desde 2006, los EU-NRLs y otros laboratorios participantes de todo el mundo han utilizado una gran variedad de métodos de RT-PCR. El método descrito por Hoffman et al. 2008a y 2008b, dirigido al segmento 10, ha demostrado detectar los 24 serotipos de VLA notificables y las cepas atípicas de VLA aparecidas hasta la fecha, mostrando suficiente sensibilidad y especificidad. Este es el método de RT-PCR en tiempo real descrito en el Manual de la OIE.

Tras la detección, debe intentarse el aislamiento del virus, y así disponer de la cepa para estudios posteriores de caracterización.

La respuesta serológica al VLA se desarrolla entre 7 y 14 días después de la infección, y suele considerarse duradera. En la actualidad, no se ha desarrollado ni validado ningún método para diferenciar a los animales infectados de los vacunados (DIVA). Aunque las herramientas serológicas pueden utilizarse para confirmar un caso clínico o demostrar que un animal está libre de la infección antes de su traslado, los objetivos principales de los métodos serológicos son: estudios de prevalencia de la infección (incluidos los programas de vigilancia) y ensayos post-vacunación. Entre una amplia gama de ensayos diferentes desarrollados a lo largo de los años con el mismo propósito, el ELISA es la técnica más utilizada para la determinación del serogrupo. El ELISA competitivo/de bloqueo (VP7) es una prueba prescrita para el comercio internacional por el manual terrestre de la OIE. Además de los c/bELISA, se han desarrollado una prueba ELISA de doble reconocimiento (VP7), que ha demostrado ser un complemento eficaz del c/bELISA.

                                                                Métodos de diagnóstico de serogrupo
                                                                                 LENGUA AZUL

                                                    Preparación de muestras para aislamiento de virus

                                                             Aislamiento de Orbivirus en cultivo celular

                                                    Aislamiento de Orbivirus en huevo embrionado de pollo


                                                          Detección de LA por rRT-PCR (Hofmann 2008)

                                                            Detección de ac frente a VLA por c/bELISA

                                                             Detección de ac frente a VLA por drELISA

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