Diagnóstico de Lengua Azul: Primer Paso
La duración de la viremia en los rumiantes infectados por el VLA es prolongada, e incluso el ARN del VLA puede detectarse mediante RT-PCR en ausencia de virus infeccioso en la sangre de los rumiantes, durante un tiempo considerablemente mayor. Esta mayor sensibilidad de detección y la reducción del tiempo necesario para el diagnóstico son las razones por las que la RT-PCR es el método de elección para la confirmación de los casos clínicos, y la sangre con EDTA y los órganos de los animales muertos, como el bazo, el pulmón o los ganglios linfáticos, son las muestras de elección para el diagnóstico del agente.
Hasta la fecha se han publicado varios métodos de RT-PCR en gel y de RT-PCR en tiempo real, dirigidos a segmentos virales conservados entre serotipos. En los Ensayos interlaboratorio de aptitud organizados anualmente por el EURL desde 2006, los EU-NRLs y otros laboratorios participantes de todo el mundo han utilizado una gran variedad de métodos de RT-PCR. El método descrito por Hoffman et al. 2008a y 2008b, dirigido al segmento 10, ha demostrado detectar los 24 serotipos de VLA notificables y las cepas atípicas de VLA aparecidas hasta la fecha, mostrando suficiente sensibilidad y especificidad. Este es el método de RT-PCR en tiempo real descrito en el Manual de la OIE.
Tras la detección, debe intentarse el aislamiento del virus, y así disponer de la cepa para estudios posteriores de caracterización.
La respuesta serológica al VLA se desarrolla entre 7 y 14 días después de la infección, y suele considerarse duradera. En la actualidad, no se ha desarrollado ni validado ningún método para diferenciar a los animales infectados de los vacunados (DIVA). Aunque las herramientas serológicas pueden utilizarse para confirmar un caso clínico o demostrar que un animal está libre de la infección antes de su traslado, los objetivos principales de los métodos serológicos son: estudios de prevalencia de la infección (incluidos los programas de vigilancia) y ensayos post-vacunación. Entre una amplia gama de ensayos diferentes desarrollados a lo largo de los años con el mismo propósito, el ELISA es la técnica más utilizada para la determinación del serogrupo. El ELISA competitivo/de bloqueo (VP7) es una prueba prescrita para el comercio internacional por el manual terrestre de la OIE. Además de los c/bELISA, se han desarrollado una prueba ELISA de doble reconocimiento (VP7), que ha demostrado ser un complemento eficaz del c/bELISA.