Claves para el diagnóstico de laboratorio

Peste equina africana: claves para su diagnóstico

Imagen de caballo

La enfermedad se diagnostica en el laboratorio mediante la detección y posterior aislamiento del virus en animales enfermos, y mediante la detección de anticuerpos en los animales que sobreviven a la infección  natural. 

Identificación del agente: Siempre que se surjan brotes fuera de las regiones enzoóticas es especialmente importante llevar a cabo el aislamiento y la serotipificación del virus, con el fin de escoger un serotipo homólogo para la vacuna.

El virus  se puede aislar de sangre tomada durante la fase febril inicial.  Otros tejidos adecuados para el diagnóstico y aislamiento del virus son el bazo, los pulmones y los linfonodos linfáticos, que se obtienen durante la necropsia.

Actualmente, el diagnóstico directo se realiza mediante la detección y serotipificación del ARN del virus usando un método de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa (RT-PCR). Las cepas aisladas se pueden serotipificar por una prueba serológica con especificidad de tipo como la de neutralización vírica (VN) y por técnicas de reacción en cadena de la polimerasa con transcripción inversa para la identificación de serotipos y por secuenciación.

Pruebas serológicas: Los caballos que sobreviven a una infección natural desarrollan anticuerpos contra el serotipo infeccioso del virus a los 8–12 días de la infección. Esto se puede demostrar por varios métodos serológicos, como la prueba de la fijación de complemento, por el ELISA, por inmunotransferencia y por VN. Esta última técnica es la usada en la serotipificación.

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Lengua azul: claves para su diagnóstico

oveja

El diagnostico preliminar basado en los signos clínicos, las lesiones post-mortem y la evaluación epidemiológica, debería ser confirmado mediante el diagnostico en el laboratorio. 

Identificación del agente: las técnicas de RT-PCR permiten un diagnóstico rápido y sensible. Existen publicados y validados diversos métodos de RT-PCR.   Debido a esta rápida identificación de genoma vírico del virus de la Lengua azul en muestras de sangre y otros tejidos, la RT-PCR es la principal herramienta de diagnóstico usada para la detección de VLA. Además existen procedimientos de RT-PCR que proporcionan información acerca del serotipo e incluso el topotipo.

La identificación de VLA tradicionalmente requiere el aislamiento y la expansión del virus en huevo embrionado de gallina, células de Culicoides, otros tejidos celulares o en un animal susceptible; y la posterior aplicación de técnicas específicas de serogrupo o serotipo.

Pruebas serológicas: la respuesta inmune humoral aparece entre 7 y 14 días tras la infección con VLA, y los anticuerpos generados son generalmente muy duraderos. Los anticuerpos específicos de serogrupo frente a VLA, se pueden detectar usando un ensayo inmunoenzimático (ELISA) dirigido a la proteína VP7 de VLA. Es un método rápido que permite la determinación de anticuerpos en suero o plasma del animal. 

Los procedimientos para identificar y cuantificar los anticuerpos frente a VLA específicos de serotipo son más complejos y se suelen basar en ensayos de neutralización.

Ambos tipos de ensayo, ELISA y neutralización, actualmente no sirven para diferenciar animales vacunados de infectados.

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